Detektor UV DWD-1 (kinerja tinggi dual beam dual wavelength) Pemrosesan data bawaan

Rentang panjang gelombang: 254nm, 280nm (deteksi simultan), pilihan lain antara 254nm, 280nm-400nm garis spektrum untuk mendeteksi dua panjang gelombang secara simultan.

* Fitur Instrumen DWD-1

Pengukuran panjang gelombang ganda protein 280nm/254nm:

Molekul protein mengandung asam amino aromatik seperti tirosin dan tritin yang mengikat ganda. Mereka memiliki sifat penyerapan cahaya ultraviolet, puncak penyerapan pada panjang gelombang 280nm, dan nilai kepadatan optik penyerapan puncak dalam panjang gelombang ini proporsional dengan konsentrasinya, sehingga dapat digunakan sebagai dasar untuk kualitatif dan kuantitatif protein, karena itu, metode penyerapan ultraviolet di 280nm biasanya digunakan untuk pemantauan kontinyu konsentrasi protein dalam sistem pelapis. Tetapi karena kandungan tirosin dan tritin dari berbagai protein berbeda, untuk menentukan jumlah yang akurat, harus memiliki produk murni protein yang akan diukur sebagai standar untuk dibandingkan, atau telah mengetahui koefisien dimusnya sebagai referensi. Selain itu, banyak zat non-protein juga memiliki kapasitas penyerapan tertentu pada panjang gelombang 280nm, yang dapat mengganggu. Terutama efek asam nuklear (purin dan pirimidin) lebih parah. Penyerapan pada 280nm 10 kali lebih kuat (per gram) daripada protein, tetapi asam nuklear lebih kuat pada 254nm dengan puncak penyerapannya di sekitar 254nm. Faktor dimming pada asam nuklear 254nm adalah dua kali lipat dari 280nm.

Protein sebaliknya, nilai penyerapan UV 280nm lebih besar dari nilai penyerapan 254nm.

Biasanya：

Rasio penyerapan cahaya protein murni: A280 / A254 "1,8

Rasio penyerapan cahaya asam nuklear murni: A280/A254 0,5

Oleh karena itu, ketika asam nukleus ada secara bersamaan dalam larutan protein (sebagian besar sistem biologis), OD254nm harus diukur secara bersamaan dengan OD280nm. Kemudian, berdasarkan rasio penyerapan kedua panjang gelombang, jumlah protein nyata diperhitungkan melalui rumus empiris untuk menghilangkan efek asam nukleus.

Konsentrasi protein = 1,45 × A280 – 0,74 × A254 (mg/ml)

Rumus eksperimental ini dibuat dengan data yang diukur dari serangkaian campuran protein (enanolase ragi) dan asam nuklea (asam nuklea ragi) yang diketahui memiliki konsentrasi yang berbeda.